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鏈霉親和素修飾PBS微球,PBS Particles-Streptavidin的介紹

2025-09-22 [105]

鏈霉親和素修飾PBS微球(通常指聚苯乙烯微球)是一種結合了鏈霉親和素高親和性與聚苯乙烯微球物理穩定性的功能化材料,廣泛應用于生物檢測、免疫分析、分子診斷及細胞分選等領域。

一、核心特性

  1. 高親和力結合
    鏈霉親和素(Streptavidin)與生物素(Biotin)的結合力較強(Kd≈10?1? M),且不受pH、溫度等因素干擾。這種特性使修飾后的微球能特異性捕獲生物素標記的分子(如抗體、核酸、蛋白質),實現高靈敏度檢測。

  2. 物理穩定性
    聚苯乙烯(PS)微球具有良好的機械強度、化學穩定性和生物相容性,表面光滑且均一性高,粒徑可控(通常100 nm–10 µm),滿足不同實驗需求。

  3. 表面功能化
    微球表面可修飾羧基(-COOH)、氨基(-NH?)等官能團,通過化學交聯(如EDC/NHS活化)將鏈霉親和素穩定偶聯于微球表面,保持其四聚體結構與生物素結合能力。

  4. 多功能衍生化
    除鏈霉親和素外,微球表面還可共修飾熒光染料、磁性顆粒或親水分子,用于改善分散性、降低非特異吸附或增強信號讀出能力。

二、制備方法

  1. 微球合成
    通過乳液聚合或懸浮聚合制備聚苯乙烯微球,控制粒徑和表面特性(如羧基化處理)。

  2. 表面活化
    使用EDC/NHS等試劑活化微球表面羧基,形成活性酯中間體,為鏈霉親和素偶聯提供反應位點。

  3. 鏈霉親和素偶聯
    將高純度鏈霉親和素溶液與活化微球混合,室溫反應2小時,通過共價鍵固定于微球表面。

  4. 封閉與純化
    加入BSA或甘氨酸封閉未結合位點,減少非特異性吸附;通過離心或透析去除游離鏈霉親和素,保存于4°C PBS緩沖液中。

三、應用領域

  1. 免疫分析

    • ELISA改進:將鏈霉親和素修飾微球與生物素標記抗體結合,用于檢測抗原,顯著提高靈敏度。

    • 側向層析技術(LFA):作為標記物,實現快速診斷(如病原體檢測)。

  2. 分子診斷

    • 核酸分析:結合生物素化探針,實現PCR產物捕獲、基因序列檢測,適用于病原體檢測和基因突變分析。

    • 微陣列芯片:作為探針固定載體,用于高通量基因表達分析。

  3. 細胞分選與成像

    • 流式細胞術:通過熒光信號和鏈霉親和素-生物素特異性結合,實現高精度細胞分選(如CD19+ CAR-T細胞分選純度>90%)。

    • 熒光顯微成像:標記細胞表面抗原,觀察細胞形態、結構及分子分布。

  4. 生物分離與純化

    • 親和層析:將鏈霉親和素固定于基質上,與生物素標記的目標分子結合,實現特異性分離。

    • 磁分離:結合磁性顆粒,通過磁場快速分離目標分子,提高分離效率。

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